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　　細(xì)胞膜熒光探針通常不會(huì)明顯影響細(xì)胞的生存力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細(xì)胞或組織的示蹤劑或長(zhǎng)期示蹤劑。除了簡(jiǎn)單的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記外，還可以用于檢測(cè)細(xì)胞的融合和粘附，檢測(cè)發(fā)育或移植過(guò)程中細(xì)胞遷移，通過(guò)FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)檢測(cè)脂在細(xì)胞膜上的擴(kuò)散，檢測(cè)細(xì)胞毒性和標(biāo)記脂蛋白等。

 

　　細(xì)胞膜熒光探針的使用方法：

　　1、染色液制備：

　　a、配置DMSO或EtOH 儲(chǔ)存液：儲(chǔ)存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。

　　b、工作液制備：用合適的緩沖液（如：無(wú)血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲(chǔ)存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。

　　

　　2、懸浮細(xì)胞染色：

　　a、懸浮細(xì)胞密度為1×106/mL加入到工作液中。

　　b、在37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞2～20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。

　　c、染色細(xì)胞試管在1000～1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。

　　d、傾倒上清液，再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液。

　　e、重復(fù)c、d步驟兩次以上。

　　

　　3、粘壁細(xì)胞的染色：

　　a、使粘壁的細(xì)胞在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。

　　b、從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過(guò)量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

　　c、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。

　　d、在37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞 2～20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。

　　e、吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

　　

　　4、流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

　　染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測(cè)。